Иммуногистохимия (игх)

Иммуногистохимическое исследование

Особенности и значение диагностического метода


Иммуногистохимия – высокоточное микроскопическое тестирование взятого биоматериала, помогающее специалистам обнаружить и провести идентификацию особых веществ, характерных для раковых клеток.

На сегодняшний день гистохимия используется с целью:

  1. Уточнения предполагаемого диагноза.
  2. Установления вида или подвида опухоли.
  3. Определения стадии злокачественного процесса.
  4. Выявления степени распространенности единичного ракового новообразования.
  5. Установления патологического очага, провоцирующего метастазы, если исследуемый образец получен из вторичного злокачественного источника.
  6. Определения особенности ответной реакции на лечение.
  7. Подтверждения результатов предыдущих анализов.
  8. Исключения вероятного присутствия других злокачественных процессов.
  9. Уточнения скорости роста опухоли.

Основная суть иммуногистохимической диагностики состоит в следующем:

  • Изучение клеток биоптата злокачественного новообразования с применением реактивов, содержащих особые белки (или антитела), помеченные специальными веществами, поддающимися детектированию.
  • Иммуноглобулины обладают пространственным строением, которое разрешает им соединяться с отыскиваемым веществом (антигеном) в онкологических клетках. Подобный химический процесс называется «антиген-антитело», позволяющий подтвердить присутствие в исследуемом материале веществ, характерных для рака.

Способы проведения


Гистохимическая методика исследования полученного образца тканей груди может проводиться двумя способами:

Способ Особенности
Прямой Строится на специфической реакции, проявляемой в момент соединения маркированных тел непосредственно с обнаруженным антигеном.
Непрямой Является более популярным, чем прямой вариант. Отличается высокой чувствительностью, при этом его основной особенностью является то, что немаркированные первичные антитела сначала соединяются с выявляемым веществом, и лишь потом осуществляется установление их присутствие вторичными мечеными антителами. К тому же начальные вещества выступают антигенами для вторичных антител.

Стоит подчеркнуть, назначаемые медикаментозные средства для лечения онкологии должны получить подтверждение ИХГ.

Стоимость процедуры

Сколько стоит выполнение ИХГ молочной железы? В большинстве регионов РФ при наличии направления специалиста данный тест можно сделать бесплатно. Однако в случае обращения пациентки в коммерческие лаборатории, представляющие платные услуги, цена анализа зависит от применяемого количества антител.

В основном при проведении исследования используется от двух до пяти антител, но могут выявляться около десятка антигенов. Исходя из этого, и определяется стоимость процедуры:

  • От 2 до 5 антител – 4000-5000 рублей.
  • До 10 антител – от 15000 рублей.

Как проводится анализ?

ИГХ проводится в несколько этапов, самый первый это долаборатоный, то есть забор тканей для анализа.

Образец получают путем биопсии, в некоторых случаях возможно отщипывание кусочка тканей или их изъятие при проведении эндоскопической или хирургической операции.

Как будет получен биологический материал, зависит от локализации новообразования и от его вида. Забранный материал помещают в формалин и только после этого направляют в лабораторный центр.

В лаборатории образец ткани подвергают нескольким изменениям:

  • Материал обезжиривают и заливают парафином. Таким образом, получаются гистологические блоки, хранить их можно вечно, поэтому и ИГХ можно при необходимости повторять.
  • Следующий этап микротомирование – получение тончайших срезов с шириной до 1,0 мкм с парафиновых блоков. Срезы распределяют на специальных стеклах.
  • Полученные срезы окрашиваются иммуногистохимическими препаратами, то есть растворами антител в определенной концентрации. Может использоваться для исследования малая панель – в нее входит 5 видов антител. Большая панель содержит от 6 и до десятков видов маркеров. Какие антитела будут вступать во взаимодействие с опухолевыми клетками, зависит от предполагаемого вида новообразования.

Результаты проведенного ИГХ становятся известны в течение 7-15 дней.

Суть исследования

Иммуногистохимический тест заключается в исследовании клеток ткани опухоли, которое проводится с помощью специальных реактивов. Эти реактивы содержат антитела – специфические белки, меченые определенными веществами, которых можно детектировать (например, флуоресцентные красители, ферменты, коллоидное золото и другие).

Антитела имеют специфическую пространственную структуру, которая позволяет им связываться с антигеном – искомым веществом в опухолевых клетках. Такая химическая реакция называется «антиген-антитело», и указывает на наличие специфических для опухоли веществ во взятом образце.

В частности, в ходе иммуногистохимического исследования могут искать некоторые рецепторы к гормонам (например, эстрогену, прогестерону и другим), онкологические маркеры, маркеры усиленного роста раковых клеток и другие антигены.

В клинической практике чаще всего применяется метод непрямой иммуногистохимии, когда антигены, полученные из ткани пациента, связывают с первичными антителами. Так получается комплекс «антиген-антитело», к которым прикрепляют вторичные антитела. Такой комплекс можно окрасить специальными красителями, и по выраженности окраски специалисты оценивают статус опухоли.

Как работает метод

В названии метода соединились три отрасли – иммунология, гистология и химия. Для анализа используют химические вещества. Реактивы насыщены антителами, находящими раковые антигены. Антитело – это белок, его структура притягивает антиген. Белок окрашивают ферментами, красителями, которые проявляются при положительной реакции.

Теоретические основы иммуногистохимии заложены в 40-е годы 20-го века. С помощью флуоресценции находили антигены в замороженных клетках. Затем стали использовать окрашенные ферментами антитела. Установили соответствия цветовой реакции и типа раковых клеток. Также определили гормоны и их рецепторы.

Практическое применение методов ИГХ:

  • Определение типа клеток;
  • Изучение секреторных внутриклеточных процессов и особенностей клеточного синтеза;
  • Определение гормонов и гормональных рецепторов.

Клетки под микроскопом после иммуногистохимии

Виды:

  • Прямой метод – маркированные антитела соединяются с искомыми антигенами.
  • Непрямой, «антиген-антитело» – неотмеченные антитела находят антигены, потом их соединения обнаруживают вторичные отмеченные антитела.

Цвет реакции показывает статус опухоли.

Иммуногистохимия (продукция для проведения исследований)

Иммуногистохимия, позволяет проводить микроскопические исследования тканей, для выявления в них специфичных антигенных свойств злокачественных образований.

Что такое иммуногистохимия при раке молочной железы

Онкологические процессы, выявленные на ранних или поздних стадиях, требуют детального изучения. Для этого применяются специфические методы, например, иммуногистохимия рака молочной железы. Эта уникальная процедура позволяет выявить нюансы течения болезни и определить дальнейшую терапевтическую тактику.

Советы астролога

Расшифровка результатов

В результате анализа указан показатель Ki-67 и статус HER2. Сначала проведем расшифровку показателя Ki-67.

Ki-67 – это белок, который используется как онкомаркер при карциноме молочной железы. Этот белок содержится в ядре клеток и в норме, но при онкозаболевании его концентрация резко возрастает. В первую очередь это касается пациентов с ER-положительным раком (повышенное содержание эстрогена в тканях молочной железы). Чем выше уровень Ki-67 в процентном отношении, тем хуже прогноз для пациента.

Расшифровка статуса HER2 более простая: он может быть положительным или отрицательным. Если статус положительный, это говорит о высоком содержании рецепторов HER2 в образце ткани. Это вызвано особым видом карциномы молочной железы, который развивается быстрее, а потому более опасный. Лечить такое заболевание нужно с помощью препаратов, действие которых направлено на белок HER2.

которые определяют ак

Также в результатах исследования могут указать статус ER и PR. Аббревиатура ER+ означает, что у пациента диагностирован рак с преобладанием рецепторов эстрогена. Точно так же маркировка PR+ говорит о раке с рецепторами прогестерона. Если после обеих аббревиатур стоит “–”, значит, в образце ткани нет карциномы молочной железы с рецепторами этих гормонов.

Итак, по итогам вышесказанного выделим две разновидности рака молочной железы:

  • С повышенной концентрацией рецепторов прогестерона или эстрогена (PR+ или ER+). Клетки этого подвида рака называют гормонально-положительными.
  • С преобладанием HER2 (HER2-положительный результат анализа).

У обоих подвидов уровень онкобелка Ki-67 в ядре или хромосомах клеток выше нормы. Рассмотрим, какое лечение назначают при тех или иных результатах ИГХ.

ER+ и PR+ рак лечат гормональной терапией. Лечение направлено на снижение соответствующего гормона в молочной железе. Такой вид заболевания лечится гораздо легче, при этом ремиссия наступает в 95 % случаев при уровне Ki-67 менее 10 %. Однако существует риск, что через несколько лет после лечения возникнет рецидив.

Есть случаи, когда результат анализа выявил HER2 +3, ER+ и PR+ одновременно. Это так называемая тройная-позитивная опухоль. В этом случае сначала назначают препарат, направленный на белок HER2. Затем в курс лечения добавляют препараты, снижающие уровень эстрогена и прогестерона.

Если результат анализа отрицателен для HER2, ER и PR, но уровень белка Ki-67 выше 10 %, диагностируют более опасный вид рака. Чаще всего он встречается у женщин из Африки и Латинской Америки. Опухоль развивается быстро и перерастает в злокачественную, поэтому здесь поможет только химиотерапия.

Базовые приготовления

Подготовка образца имеет решающее значение для сохранения морфологии клеток, архитектуры ткани и антигенности целевых эпитопов . Это требует надлежащего сбора, фиксации и разрезания тканей . Для фиксации ткани часто используется раствор , но могут применяться и другие методы.

Подготовка срезов ткани

Затем ткань можно разрезать или использовать целиком, в зависимости от цели эксперимента или самой ткани. Перед разрезанием образец ткани можно залить средой, например парафином или криомедиа. Срезы можно нарезать с помощью различных инструментов, чаще всего микротома , криостата или вибратома . Образцы обычно нарезают в диапазоне от 3 до 5 мкм . Затем срезы помещают на предметные стекла, обезвоживают с использованием спиртовых промывок возрастающих концентраций (например, 50%, 75%, 90%, 95%, 100%) и очищают с использованием детергента, такого как ксилол, перед тем, как отобразить их под микроскопом.

В зависимости от метода фиксации и сохранения ткани для образца могут потребоваться дополнительные действия, чтобы сделать эпитопы доступными для связывания антител, включая депарафинизацию и поиск антигена. Для фиксированных формалином и залитых парафином тканей часто требуется извлечение антигена, которое включает предварительную обработку срезов нагреванием или протеазой . Эти шаги могут иметь значение между окрашиванием целевых антигенов или отсутствием окрашивания.

Снижение неспецифического иммуноокрашивания

В зависимости от типа ткани и метода обнаружения антигена может потребоваться блокировка или подавление эндогенного биотина или ферментов до окрашивания антителами. Хотя антитела проявляют предпочтительную авидность к специфическим эпитопам, они могут частично или слабо связываться с сайтами неспецифических белков (также называемыми реактивными сайтами), которые аналогичны родственным сайтам связывания на антигене-мишени. Большое количество неспецифического связывания вызывает сильное фоновое окрашивание, которое маскирует обнаружение целевого антигена. Чтобы уменьшить фоновое окрашивание при IHC, ICC и других методах иммуноокрашивания, образцы инкубируют с буфером, который блокирует реактивные сайты, с которыми в противном случае могут связываться первичные или вторичные антитела. Обычные буферы включают нормальную сыворотку, обезжиренное сухое молоко, BSA или желатин. Для большей эффективности доступны коммерческие блокирующие буферы с запатентованными формулами. Методы устранения фонового окрашивания включают разведение первичных или вторичных антител, изменение времени или температуры инкубации и использование другой системы обнаружения или другого первичного антитела. Контроль качества должен, как минимум, включать ткань, которая, как известно, экспрессирует антиген, в качестве положительного контроля и отрицательные контроли ткани, которая, как известно, не экспрессирует антиген, а также тестируемую ткань, зондируемую таким же образом, с исключением первичного антитела (или лучше , абсорбция первичного антитела).

Игх (иммуногистохимия) при раке молочной железы: нормы и расшифровка

Онкологические заболевания грудных желез диагностируются у женщин довольно часто. Поэтому диагностические мероприятия, позволяющие обнаружить опасную опухоль, не теряют актуальность.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы предназначено для определения восприимчивости злокачественных клеток к конкретным веществам.

Посредством исследования выясняют, корректно ли осуществляемое лечение.

Игх – что это за исследование?

Применяемое в онкологии иммуногистохимическое исследование позволяет обнаружить взаимосвязь между белками, синтезируемыми злокачественными клетками, и антигенами. Выявив эту связь, специалисты устанавливают вид и структуру новообразования.

Цель исследования

ИГХ при онкологических патологиях грудных желез осуществляют, чтобы:

  • установить вид заболевания, восприимчивый к определенной терапии;
  • выявить метастазы, пущенные опухолью, и степень их распространения;
  • найти источник метастазов;
  • установить стадию развития выявленной опухоли;
  • оценить действенность терапии;
  • узнать скорость распространения метастазов;
  • выявить чувствительность кровяных клеток к конкретным лекарственным веществам для отсеивания неэффективных медикаментов.

Показания к ИГХ

Диагностическое исследование применяется для определения состояния любой части человеческого организма. Назначают процедуру не только при раке грудных желез, но и при любых новообразованиях, предположительно являющихся злокачественными. Посредством ИГХ определяют состояние эндометрия при:

  • появлении метастазов;
  • патологиях матки;
  • бесплодии;
  • неудачных процедурах ЭКО;
  • болезнях органов тазовой области, имеющих разную этиологию;
  • постоянном самопроизвольном прерывании беременности.

Противопоказаний к проведению процедуры нет. Отказываются от исследования, только если по каким-либо причинам у пациента невозможно взять биоматериал.

Ход исследования

Для проведения иммуногистохимического теста методом биопсии забирают некоторое количество опухолевой ткани грудной железы. Забор осуществляется на участке, где специалист подозревает скопление злокачественных клеток.

Перед процедурой медик отмечает выбранную точку на груди пациентки. Также на анализ могут взять куски опухоли, вырезанные при хирургическом вмешательстве.

Далее диагностическое мероприятие проводится следующим путем:

  1. Собранный биоматериал относят в лабораторию.
  2. Опухолевые образцы опускают в емкость с формалином.
  3. Биоматериал обезжиривают.
  4. Вливают парафиновую жидкость, позволяющую определить структуру и вид опухолевых тканей.
  5. Отрезают кусок опухоли толщиной 1 мм.
  6. Кладут на лабораторное стекло.
  7. В качестве красителей используют химические реагенты и антитела.
  8. Итоги теста готовы спустя две недели.

Для обнаружения рака молочных желез берут разные маркеры. Если по итогам теста выявлено наличие в опухолевых тканях значительного количества женских половых гормонов, то опухоль активно развивается.

Возможно даже, что уже пошли метастазы. Если скопление гормонов среднее, то злокачественные клетки размножаются неактивно.

А значит, при грамотном и своевременном лечении у пациентки есть возможность восстановить здоровье.

Положительный итог гормонального лечения возможен, если маркер Ki-67 при злокачественной опухоли молочной железы не превышает 15 – 17%. Новообразование стремительно растет, если маркер достигает 35%.

В этой ситуации незамедлительно осуществляется химиотерапия, позволяющая затормозить размножение злокачественных клеток.

Если же маркер выше 85%, то проводить лечение уже поздно, смертельный исход неизбежен.

Прогностические маркеры

По ним определяют наиболее вероятное поведение новообразования на момент проведения теста. Нет влияния терапии на исследование. Тест позволяет определить агрессивность опухоли. Прогноз важен для подбора наиболее подходящих медикаментов и лечебных процедур.

Диагностические маркеры

Исследование показывает действенность проводимого лечения. Если обнаружено наличие агрессивного рака, то назначают химиотерапию. 

ИГХ – сложный тест, при котором используют большое количество онкологических маркеров. Чем больше маркеров проверяют, тем выше стоимость исследования. Тест эффективен в определении вида онкологического заболевания, помогает назначить оптимальную терапию.

Гистохимия (окрашивание срезов в гистологии)

Перед тем, как патологоанатом (морфолог) начнёт рассматривать под микроскопом участок ткани молочной железы, полученный в результате биопсии, ему необходимо его окрасить специальными красителями.

Гистохимические красители наносят на тонкий срез участка ткани, чтобы рассмотреть под микроскопом, какие клетки там присутствуют, их расположение по отношению друг к другу (структуру ткани). Световая микроскопия является рутинным методом изучения окрашенных срезов ткани, широко используется в диагностике рака молочной железы. Наиболее часто для окрашивания срезов ткани используют:

  • Гематоксилин — окрашивает клеточное ядро в темно-синий цвет;
  • Эозином — делает цитоплазму клеток розовой. Совместное их использование называется гематоксилин-эозиновое окрашивание.

Что такое иммуногистохимия (ИГХ)

Патологоанатом — это врач, который долго учился в медицинском университете, чтобы знать, как с помощью микроскопа отличить в окрашенном срезе ткани раковые клетки от нормальных. Обычно для постановки диагноза (доброкачественная это патология или злокачественная) ему достаточно рассмотреть под микроскопом срез ткани, окрашенный гематоксилином и эозином. Но иногда этого бывает недостаточно. В такой ситуации на помощь приходит иммуногистохимия, которая к морфологической идентификации клеток и тканей добавляет иммунологический компонент.

Методика иммуногистохимии (ИГХ) дополняет морфологическое распознавание клеток и тканей, используя антитела к известным антигенам, которые являются специфическими для определенных типов клеток или клеточных компонентов. Расположение этих антител можно увидеть, используя световую микроскопию, так как антитела содержат зрительно-распознающиеся метки.

Первые методики иммуногистохимического анализа рака молочной железы использовали антитела с прикрепленными к ним флуоресцирующими метками, что требовало применения специального флуоресцентного микроскопа, позволяющего увидеть локализацию этих антител в срезе ткани молочной железы.

За последние 30 лет удалось существенно упростить методику, которая применяется при ИГХ исследовании молочной железы, за счет использования более специфичных антител (моноклональных антител) с ферментативными метками. Это, в свою очередь, позволило при иммуногистологических исследованиях молочной железы использовать световую микроскопию, которая намного дешевле, и поэтому наиболее доступная. Однако радиоактивные элементы (пероксидаза, щелочная фосфатаза и флуоресцеин), без которых иногда не обойтись, требуют специальных методик и до сих пор широко используются.

Возникшая ситуация у каждой конкретной женщины с раком молочной железы требует применения тех или иных наборов антигенов (панелей антигенов), что в свою очередь требует от специалиста, выполняющего ИГХ, исследование срезов ткани молочной железы, знаний и громадного опыта.

Необходимость использования иммуногистохимии при раке молочной железы, контроль её качества и интерпретация полученных результатов должны контролироваться патоморфологическим отделением

Важно, чтобы расшифровка полученных данных при ИГХ исследовании использовалась только в сочетании с морфологическим анализом тканей молочной железы, полученным в результате покраски их гематоксилином и эозином

Сегодня иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы является рутинным методом в большинстве морфологических (патогистологических) лабораториях и используется для уточнения диагноза, а также с прогностической целью, в качестве предикативного (предсказывающего) указателя, как поведет себя рак молочной железы в дальнейшем.

Автоматизированный метод ИГХ

Автоматизированный метод ИГХ, проводимый на иммуностейнерах BenchMark, дает возможность:

  • оценивать биологический потенциал опухолевой клетки – прогноз течения опухолевых процессов, темп роста, реакцию на гормональную и химиотерапию;
  • достоверно оценивать фенотип опухоли, что позволяет избежать более продолжительных по времени и дорогостоящих диагностических мероприятий.

Применение иммуностейнера BenchMark ULTRA и BenchMark XT – это возможность проводить важные методики для прогноза и выбора тактик лечения:

  • экспрессию протоонкогенов в клетках рака молочных желез;
  • выявление гистогенетической принадлежности неклассифицируемых новообразований, определение биологического потенциала опухолей;
  • выявление рецепторов стероидных гормонов;
  • иммунодиагностика ходжкинских и неходжкинских линфом.

Использование уникальных запатентованных систем:

  • гарантирует воспроизводимость и качество исследований;
  • дает возможность установить тканевую или даже органическую принадлежность новообразования, что в свою очередь позволяет опровергнуть или доказать метастатический характер опухоли;
  • дает возможность проводить исследование без присутствия пациента (необходимы только стекла гистологических препаратов и парафиновые блоки).

Что это такое

Если говорить о том, что такое ИГХ, то суть данного диагностического метода заключается в том, чтобы получить от пациента материал из области, где предполагается локализация патологии, после чего проводится лабораторное обследование полученных тканей.

В области онкологии исследования ведутся уже очень давно. На данный момент пока еще не существует универсального лекарства от рака, но диагностика зашла достаточно далеко, что позволяет быстро и точно определить наличие злокачественных клеток в организме пациента.

Это дает возможность получить качественное лечение на той стадии, когда болезнь только начинает прогрессировать, поэтому у больного есть все шансы на дальнейшую счастливую жизнь.

Одним из самых эффективных анализов является ИГХ. Он основан на знаниях медицины о том, что клетки опухоли способны вырабатывать особые белки, которые ученые называют антигенами. То есть, если результаты исследования тканей покажут наличие подобных элементов, можно говорить о присутствии онкологии. Белок, который вырабатывается злокачественными клетками, связывается с антителами. То есть, иммунногистохимический анализ сразу покажет, что проблема существует.

Чтобы получить четкие данные, специалисты обрабатывают ткани, которые были получены методом биопсии, несколькими видами антител. Далее проводится стандартное исследование под микроскопом. Стоит заметить, что антитела, которые вступили в контакт с белком, вырабатываемым злокачественными клетками, не заметить просто невозможно. При соединении они получают свойство флуоресценции, а такое свечение под микроскопом видно очень хорошо. Таким образом, если лабораторный работник обнаружит светящиеся элементы, можно говорить о наличии онкологии.

Более того, с помощью иммуногистологических исследований появляется возможность получить сведения об очаге болезни, увидеть присутствие метастазов и определить уровень эффективности проводимого лечения. Благодаря ИГХ у специалиста будет возможность установить стадию онкологического заболевания и скорость роста опухоли, что позволяет более качественно назначить лечение.

Иммуногистохимический анализ считается самым эффективным в своем роде. Он значительно информативнее, нежели обычный гистологический. Однако в спорных ситуациях врачи стараются провести обе диагностические процедуры.

Рейтинг
( Пока оценок нет )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!:

Adblock
detector